２０１５年０７月 中国民康医学 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｊｕｌ，２０１５ Ｖｏ１．２７ Ｓｅｍｉｍｏｎｔｈｌｙ Ｎｏ．１３ 第２７卷半月刊第１３期 【综 述】 狭窄法动物深静脉血栓模型方法学及其 应用研究进展 卜鹏飞，周如丹，赵学凌 （昆明医科大学第一附属医院骨科，云南昆明６５００３２） 【摘要】 动物血栓模型是人类研究血栓性疾病及开发临床药物的重要工具，狭窄法动物血栓模型是在结扎法动物血栓模型的基础上改 进形成的，因其符合临床患者的发病特点，故得到广泛使用。本文就其制作方法、机制、评价及其应用研究进展作一个综述，为血栓性疾病基础 与临床研究提供较实用的方法学依据。 【关键词】 动物血栓模型；狭窄法；综述 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－０３６９．２０１５．１３．０５１ 中图分类号：Ｒ一３３２ 文献标识码：Ａ 文章编号： １６７２—０３６９（２０１５）１３—００８８—０３ 深静脉血栓（ｄｅｅｐ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ。ＤＶＴ）是外 回纳腹腔脏器并缝合腹壁，计时２～６ ｈ后重新打开 科常见的周围血管性疾病，深静脉血栓导致的静脉 腹腔，在结扎点下方２ ｅｍ处阻断血流，沿血管腔纵 瓣膜功能不全及其相关并发症对患者的健康造成很 行剖开，取出血栓秤量其干重。实验得出血栓的成 大威胁，在临床上该病一直深受重视。著名医学家 栓率在３ ６ ｈ，分别为６０％ ８０％和１００％。此后． 魏尔啸在１９世纪就提出静脉血栓形成的三大因素 其他国内外学者在此基础上进行了更多的探索。赛 是血流淤滞、血液高凝状态及静脉壁的损伤［１］。因 力克・马高维亚等＿３ 在结扎下腔静脉时将一根导丝 为受相关因素及伦理道德的限制，研究人员不可能 与下腔静脉一起结扎，并用血管夹阻断下腔静脉下 在患者身上直接实验和取得研究数据，这样。寻求一 段血流．１ ｈ后撤掉血管夹并拿出导丝，成功构建了 种科学的且具有可行性的研究模型是必要的。从最 血栓模型，其认为此模型能保障少量血液回流，符合 初研究至今，国内外学者探索应用的深静脉血栓动 临床患者ＤＶＴ形成的急性期病理演变，是一种动态 物模型种类繁多，每种动物模型都有其优缺点和侧 的研究模型。Ｄｉａｚ ＪＡ＿４ 等在此基础上做了改进。将 重点。狭窄法造模机制因符合外科术后卧床患者的 ５—０缝线与下腔静脉一起结扎，但没有进行下腔静 临床发病特点而在血管外科及骨科的基础研究中应 脉下段血流的阻断，之后抽取缝线而成功建立深静 用较广，故本文就狭窄法制作动物血栓模型方法学 脉血栓模型。２０１１年Ｂｒｉｌｌ￣ ］等在上述方法的基础 及其应用作一综述。 １ 狭窄法动物血栓模型的制作方法 上又进行了改动，在结扎下腔静脉的同时将一个 ３０Ｇ注射针头并排放置，结扎完成后移去３０Ｇ注射 Ｒｅｙｅｒｓ等＿２ 在１９８０年通过结扎大鼠下腔静脉 针头，可造成下腔静脉大约９０％的狭窄率。以上方 首次建立大鼠深静脉血栓形成模型。开创了通过结 法即为“狭窄法”，该模型在控制血液阻滞和组织缺 保证了一定程度的血液流动性，符合临 扎下腔静脉制作血栓模型的先河。具体操作方法如 氧的情况下，下：大鼠麻醉固定后，沿腹白线切开，长度以适合手 床术后长期卧床患者深静脉血栓形成的发病机制， 术操作为宜，将腹腔脏器用棉签拔出，并用生理盐水 更适合临床血栓疾病的研究。浸泡过的纱布包裹，置于大鼠左侧，暴露下腔静脉后 ２狭窄法动物血栓模型的机制 仔细分离，将附着与静脉后壁的腹主动脉钝性分离， Ｂｒｏｏｋｓ ＥＧ等学者Ｌ６ 研究认为应用狭窄法结 分离后于左肾静脉与下腔静脉交汇处用丝线结扎下 扎下腔静脉后．造成下腔静脉血流淤滞而非完全阻 腔静脉，使静脉血液回流受阻。完成上述操作后， 断，血流淤滞导致内皮细胞缺血缺氧，造成内皮细胞 损伤，启动外源性凝血途径而发生血栓。白云城＿９ 基金项目：２００９年国家自然科学基金面上项目（３０９６０３８９）；２０１２年云 等通过狭窄法成功复制了大鼠深静脉血栓模型，并 南省卫生科技内设研究机构项目（２０１２ＷＳ０００７）。 认为通过结扎下腔静脉并不是引起血栓形成的原 作者简介： 鹏飞（１９８９一），男，在读硕士研究生，研究方向：深静脉血 因，而狭窄后造成静脉内少量血液流动引起的血管 栓的基础及临床研究。 通讯作者：赵学凌，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｘｕｅｌｉｎ＠ｒｉｐ．ｋｍ１６９．ｎｅｔ。 ８８ 内皮细胞缺氧，启动了内皮细胞的活化，这才是血栓 形成的关键因素。也有人＿ｌ叫认为，内皮细胞缺血缺 ２０１５年０７月 中国民康医学 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｊｕｌ，２０１５ Ｖｏ１．２７ Ｓｅｍｉｍｏｎｔｈｌｙ Ｎｏ．１３ 第２７卷半月刊第１３期 氧导致大量氧自由基形成损伤内皮细胞是血栓形成 建立小鼠下腔静脉深静脉血栓模型，通过观察血栓 的原因之一。Ｒｕｂａｎｙｌ １］通过研究认为，缺氧可使内 皮细胞释放血管收缩因子，加重微血栓的形成。总 形成后下腔静脉及血栓栓子中巨噬细胞炎性蛋白一 １仅（ＭＩＰ一１ ）的表达及其与血栓栓子溶解之间的关 解过程，给予ＭＩＰ一１ 中和抗体可阻断其溶栓效应。 之，狭窄后造成静脉血流淤滞，内皮细胞缺氧并损伤 系，得出ＤＶＴ形成后ＭＩＰ一１ｄ参与了血栓栓子的溶 内皮细胞，从而启动了外源性凝血系统形成血栓。 ３狭窄法动物血栓模型的评价 一４．２ 血栓性疾病方面的诊断、治疗研究 顾毅 １ ８］采用此模型，插入Ｆｏｇａｒｔｙ导管取血栓，观察 般来说．一个动物血栓模型的最后评价都是 等［依据病理结果为标准。它可以清楚显示出血栓的形 不同时相导管取血栓对血管壁的影响，探讨应用球 态、组成以及血管壁的损伤情况。但是，在血栓形成 和消退过程中的各种动态变化则有赖于其他检测手 段。比如血液中各种与血栓形成有关的蛋白测定，血 管内血流动力学测定等。但是对于啮齿类动物ＤＶＴ 模型来说，因动物体积太小无法操作及其他等原因， 物理学方法测定血流动力学及超声等检测手段．在 实际操作中一般很少应用，故主要的评价方式为血 液及组织的生化和病理检测。戎建杰等 。］通过观 察静脉通畅度、胶原纤维的沉积、有无附壁血栓形 成、平滑肌肌动蛋白的表达、内皮细胞损伤程度等， 研究和比较系统性溶栓和导管直接溶栓在急性深静 脉血栓形成后静脉壁形态学的影响及近期疗效。王 辉等［１ ］根据血栓形成的不同时间点。应用超声消融 技术对超声溶栓效果、血管再通情况、静脉壁及瓣膜 的病理变化进行了研究，探讨腔内超声溶栓治疗深 静脉血栓的疗效。 ４狭窄法动物血栓模型的应用 ４．１凝血、纤溶因子方面的研究勾红菊等［１ 利 用ｓｌｉｔ２过表达转基因小鼠进行下腔静脉结扎造模。 通过观察血栓形成的情况、血栓重量长度比、测量出 血时间、ＨＥ染色观察血栓形成的病理形态，发现 ｓｌｉｔ２过表达能通过抑制白色血栓形成而有效抑制深 静脉血栓的形成。顾取良等［】 分别对ＳＧＴ基因敲 除小鼠及野生型对照鼠进行下腔静脉结扎建立ＤＶＴ 模型，并观察建模后两种小鼠体内血栓形成情况。测 定凝血时间、出血时间、血栓重量及长度，ＨＥ染色观 察血栓形成的病理形态特点，ＥＬＩＳＡ法检 ０血清中 白细胞介素一６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６，ＩＬ一６）和可溶性细胞间 黏附分子一１（ｓｏｌｕｂｌｅ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ一 １，ｓＩＣＡＭ一１）的表达，结果发现ＳＧＴ基因敲除能有 效抑制ＤＶＴ的形成，其作用机制可能与血小板功能 受影响及细胞间黏附分子表达改变有关。吴大勇 等¨ 利用９９Ｔｃｍ一聚合白蛋白对家兔下腔静脉血栓 模型显像，观察９９Ｔｃｍ—ＭＡＡ显像诊断静脉血栓的 准确性，得出９９Ｔｃｍ—ＭＡＡ显像可用于观察家兔下 腔静脉血栓模型，但显像准确率较低。刘海平等 １ 囊导管取血栓术治疗ＤＶＴ形成的时机。白云城 等＿１ ９］采用狭窄法制备下腔静脉血栓模型．并对血栓 形成的时机做了详细研究，得出ｓＤ大鼠狭窄法造模 结束至造模后６ ｈ是血栓形成的起始期，造模后６ ４８ ｈ是血栓形成的稳定期。造模后７２ ｈ进入血栓消 退期，至２１ ｄ血栓完全消退，下腔静脉再通。 ４．３ 临床药物方面的研究杨熠等［２ｏ］通过此种模 型研究氯吡格雷抗血栓的作用，发现氯吡格雷通过 特异性的抑制ＡＤＰ的活性从而达到抑制各种动静 脉血栓形成的作用。王高学等［２¨通过实验得出新 型纤溶酶ＦＡ—Ｉ无论经静脉注射还是口服均能达到 抗栓、溶栓之功效。马建等＿２ 通过观察低分子量肝 素（ＬＭＷＨ）对小鼠凝血时间及大鼠静脉血栓形成的 影响，对其主要药效学进行了研究。并与国外同类产 品Ｃｌｉｖａｒｉｎ及普通肝素进行了比较，得出结论：ＬＭ— ＷＨ具有生物利用度高、抗血栓作用强和对凝血系 统影响小的特性。陈秋生［ ］等观察抗凝血酶Ⅲ（ＡＴ 一Ⅲ）在大剂量时具有较好的抑制静脉血栓形成的 作用。 ５结论与展望 目前ＤＶＴ模型所选用的动物主要包括啮齿类 和灵长类两大种类，啮齿类动物以大鼠、小鼠为 主 ］，灵长类动物多选用狒狒 。狭窄法制作动 物血栓模型简便易行，对于上述种属都能适用。目 前，试验中所控制的静脉狭窄率没有统一标准。基 本都根据个人实验自行设定，因此探索一个合适的 “狭窄率”很有必要，对于实验数据的统一具有重要 作用。随着动物转基因技术的进步。狭窄法血栓模 型对分析血栓相关性疾病的形成机制、明确凝血、纤 溶物质的功能、开发新的抗凝、溶栓药物将发挥更大 作用。 参考文献 ［１］ Ｖｉｒｃｈｏｗ Ｒ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｍｂｏｌｉ［Ｍ】．Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ：Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｈｉｓｔｏｒｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ：１８４６：２２－２３． ［２］Ｒｅｙｅｒｓ Ｉ，Ｍｕｓｓｏｎｉ Ｌ，Ｄｏｎａｔｉ ＭＢ，ｅｔ ａ１．Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆ ａｓｐｉｉｒｎ ａｔ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｔｏ ｍｏｄｉｆｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍ— ｂｏｓｉｓ，１９８０，１８（５）：６６９． ８９ ２０１５年０７月 第２７卷半月刊第１３期 中国民康医学 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｊｕｌ。２０１５ Ｖｏ１．２７ Ｓｅｍｉｍｏｎｔｈｌｙ Ｎｏ．１３ （上接第７８页） 列腺素Ｅ１的一种衍生物，其作用机理为：在体内迅 速转化为米索前列腺酸，增强子宫张力，增强子宫平 参考文献 ［１］盛祯．米索前列醇在预防产后出血中的应用效果［Ｊ］．中国乡 村医药，２０１４，２１（２）：３８—４７． 滑肌的收缩能力，增强产妇的宫缩，促进胎盘与子宫 壁分离，使产妇第三产程缩短，出血量降低，出血症 状得到改善¨６］。该药物具有口服后吸收好，起效 快，使用简单及方便的优点。宫缩素是一种传统的 增强宫缩的药物。作用机理为：进人产妇体内后，对 子宫平滑肌的肌浆内的缩宫素受体产生刺激。间接 刺激子宫平滑肌收缩作用＿７］。但有一些产妇对宫 缩素不敏感，这使得宫缩素难以发挥较好的疗效 ［２］ 陆勤云．米索前列醇在防治孕产妇产后出血中的ｌ临床应用价 值［Ｊ］．现代医药卫生，２０１４，１２（４）：５８０—５８１． ［３］沈静．米索前列醇预防产后出血４９例的临床观察［Ｊ］．现代养 生，２０１４，５（２Ｏ）：９９． ［４］ 单美云．米索前列醇预防产后出血的临床观察［Ｊ］．药物与人， ２０１４，２７（４）：８４—８５． ［５］ 吴朗玉．米索前列醇在预防产妇产后出血方面的效果分析 ［Ｊ］．当代医药论丛，２０１４，８（１５）：２８６—２８７． 本研究结果表明，观察组产妇的第三产程时间、 分娩后２ ｈ内的出血量及产后出血的发生情况均短 ［６］ 王志华．米索前列醇治疗产后出血的药理作用及临床疗效 ［Ｊ］．中国药物经济学，２０１４，７（１１）：４６—４７． ［７］李红．探析治疗产后出血的新进展［Ｊ］．当代医药论丛，２０１４， １２（１８）：２５５—２５６． 于或少于对照组，提示口服米索前列醇预防产妇产 后出血的临床效果优于肌内注射缩宫素效果。 （收稿日期：２０１５—０１—２０） 编辑：王冰